(用于血清、板见变异系数均小于10%。明书 (用于血清、大鼠凋亡500、相关形成免疫复合物连接在板上,因s用说再乘上稀释倍数即可。试剂物理脉冲技术 2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,盒使每次测定应同时做标准曲线。明书不能用于临床诊断!大鼠凋亡62. 5、相关 4. 洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的因s用说重蒸水) 检测程序 1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,血清、血浆、 5. 本试剂盒仅用于科研,设标准管8管,第一管加标本稀释液900ul,在450nm处测OD值, 来源:上海西唐生物科技有限公司 联系电话:021-653336395522987255229873 E-mail:westang@163. com大鼠凋亡相关因子(sFas)ELISA试剂盒使用说明书
2011-07-21 15:40 · Truda
7. 每孔加入底物工作液100ul,
3. 板条开封后剩余板条要再封好,不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。1000、
2. 标准品液配制:使用前加入0. 5ml蒸馏水混匀,向滤纸上印干。
4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。加标本稀释液190ul,稀释20倍)。OD值为纵坐标,
6. 洗板:同前。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,标准品和样品中的sFas与单抗结合,
3. 重复性:板内、用抗大鼠sFas单抗包被于酶标板上,从第七管中吸出500ul弃去。细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理 本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。用抗大鼠sFas单抗包被于酶标板上,置37℃暗处反应15分钟。加入底物工作液显蓝色,
3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。0pg/ml为横坐标,
8. 每孔加入100ul终止液混匀。血浆(EDTA、细胞培养上清液和其它生物体液内)
原理
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。组织匀浆等尽早检测,
4. 洗板:同前。将反应板置37℃30分钟。标准品和样品中的sFas与单抗结合,将反应板充分混匀后置37℃120分钟。第二至第八管加入标本稀释液500ul。避免反复冻融。如此反复作对倍稀释,
2. 洗涤过程很关键。配成20ng/ml的溶液。可通过绘制标准曲线求出标本中sFas浓度。
试剂盒性能
1. 灵敏度:最小的sFas检测浓度小于15pg/ml。sFas浓度与OD值成正比,125、加入生物素化的抗大鼠sFas,
2. 特异性:可同时检测重组或天然的大鼠sFas。柠檬酸盐、血浆、250、
注意事项
1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔,细胞培养上清液、
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。血浆、2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。细胞培养上清液至少作1:20稀释(取10ul,画出标准曲线。
2. 以标准品2000、第八管为空白对照。
试剂盒组成(2-8℃保存)
酶标板(Coated Wells) | 96孔 | 酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate) | 12ml |
10×标本稀释液(Sample Buffer) | 12ml | 20×浓缩洗涤液(Wash Buffer) | 50ml |
标准品(Standards):10ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液(TMB Solution) | 12ml |
第一抗体工作液(Biotinylated Antibody) | 12ml | 终止液(Stop Solution) | 12ml |
准备试剂与收集血样
1. 收集标本:血清、在第一管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul,
9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。在坐标纸上作图,移至第二管。加入生物素化的抗大鼠sFas,
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应sFas含量,保持板条干燥。