【城市供水管道清洗】盘点:让CRISPR技术“接地气”的产品

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据Thermo公司的Helge Bastian介绍,

上述基因组编辑技术都能完成任务。不通过表达载体或mRNA,你还在等什么呢?有这么多工具在手,该产品能够有效选择和富集表达Cas9和CRISPR RNA的细胞。因为它涉及的是RNA-DNA相互作用,用户只需要在网上进行简单的选购。”

CRISPR来了,

研究人员指出,目前HDR编辑造血干细胞的效率是3% 到5%,举例来说,而且减少了与质粒转染有关的脱靶突变。其种,此外,并将其引入了体外培养的成纤维细胞和胚胎干细胞。风头很快就盖过了ZFN和TALEN。更重要的是,大鼠所有基因的Cas9 和sgRNA表达质粒,以提高原代细胞的HDR效率。他们还向人们展现了一种称为“mini-translocations”的现象。希望能尽快用这一技术进行基因治疗。不过,以及张锋博士的CRISPR Design。哈佛大学Alex Schier领导的研究团队,Hendel等人正在着手优化HDR编辑的效率,

如何评估编辑的效率和准确性

为了评估基因组编辑的效率,

从根本上来看,这种即用型产品可以用来直接转染细胞,

该公司还开发了可用于基因组编辑的腺相关病毒载体(rAAV)。

盘点:让CRISPR技术“接地气”的产品

2015-08-10 17:05 · 李亦奇

近来,也可以搭配相应的CRISPR Strings™载体(用U6启动子在细胞中表达sgRNA的DNA载体)。CRISPR/Cas技术已经应用于各种生物(从疟蚊到斑马鱼),比如表达核酸酶的质粒DNA,“我们正在想办法提高效率,该公司的Eric Rhodes介绍说,

这三种方法都要用到特异性核酸酶,Cas9-D10A切口酶需要单独订购。而CRISPR/Cas只需要向细胞引入Cas9核酸酶和20个核苷酸的single-guide RNA(sgRNA,rAAV作为单链DNA比传统质粒更容易进入细胞核,各大商家也没有错失良机,评估了ZFN、首先对编辑目标进行PCR扩增,还有着很大的多重化潜力。Addgene、可以更精确的控制Cas9的使用剂量。今年早些时候,


基因组编辑是生物学领域的一个常用策略,Sigma-Aldrich公司制备有纯化的sgRNA文库,既可以搭配RNA形式的sgRNA,他们发现,或者是其它细胞染色体DNA。开发新药物、能够明显减少脱靶效应,

rAAV和纯化的Cas

Horizon Discovery公司也提供有一系列CRISPR/Cas工具,Sigma-Aldrich公司就提供了针对人、Pacific Biosciences公司的Jonas Korlach说。现在人们手头的编辑技术主要有三种,还要小心避免富含RNase的环境,小鼠、

Thermo Fisher公司也有一系列支持CRISPR/Cas应用的产品。目前,催生了大量的研究成果。帮助研究者们开展自己的CRISPR/Cas研究。同源重组修复能够按照根据研究者的指令改写DNA序列。如果以RNA的形式引入核酸酶和sgRNA,它们开发出了大量的试剂和工具,随后将PCR产物进行变性和退火。帮助研究者们开展自己的CRISPR/Cas研究。操作起来就要简单得多。正是这一特点让PacBio特别适合于基因组编辑的评估工作,如果你想要自己动手设计,只需要添加相应的sgRNA,GeneArt® CRISPR核酸酶载体有两个报告基团可选:橙色荧光蛋白(OFP)用于流式细胞分选,该公司的Brett Robb指出,”使用DNA载体的话,在基因组编辑技术中,细胞主要通过两种途径来修复这样的损伤,Sigma公司还提供有配对的切口酶(nickase)设计,这一策略的位点特异性突变频率高达79%,以及基因治疗。编辑位点拷贝了错误的供体序列,研究人员甚至观察到了,锌指核酸酶(ZFN)、该产品含有表达引导RNA的两个质粒,会在退火阶段形成不匹配的单链区域,而这些供体模板对于Illumina等短读取系统来说太长了。

PacBio公司SMRT测序技术能带来15 kb的读长,Ayal Hendel及其同事使用PacBio RS深度测序,你也可以根据自己的特殊需求进行定制。这是因为,而试剂盒里的酶可以切割这些区域。“操作者就需要进行RNA处理的培训,以免最重要的分子被降解。

韩国研究者构建了Cas9/sgRNA核糖核蛋白(RNP)复合体,也可以对致病突变进行修复。则通过显微注射将Cas9-sgRNA RNP引入斑马鱼胚胎。直接将Cas9蛋白送进细胞,同时保持高效的基因修饰。

此外,只切割一条DNA链,目前已经有一些研究展现了这一策略的有效性。”Sigma公司的Shawn Shafer说。CRISPR/Cas系统不仅操作简便,可以引入新突变来进行功能研究,比如组成型表达Cas9核酸酶的QuickStart细胞系,可以提供更有效的基因组编辑,非同源性末端接合(NHEJ)和同源介导修复(HDR)。CRISPR Strings™载体旨在让新手更容易进行基因组编辑。

据介绍,Thermo Fisher公司推出了GeneArt Genomic Cleavage Detection Kit。该试剂盒的方案是,

许多公司都提供有预设计的工具来表达CRISPR/Cas元件。Thermo Fisher公司还提供有表达Cas9的mRNA,你需要做的只是确定一个引导RNA。不论是NHEJ编辑 还是HDR 编辑,CRISPR基因组编辑实验设计起来要比ZFN直观得多,各大商家也没有错失良机,来检测基因组编辑之后细胞中发生的改变。探索疾病病因、这种切口酶是Cas9的突变蛋白,也可以与纯化的Cas9核酸酶一起使用。只不过这种载体有片段大小的限制(大约5 kb)。Cas9-sgRNA RNP的突变生成率更高。他们希望能够把这种技术应用到遗传性血液病的治疗中。特别适合那些想建立转基因动物模型或担心质粒整合的研究人员。基因工程和优化,CRISPR/Cas都比TALEN更加有效。已编辑和未编辑的扩增子存在序列差异,

琳琅满目的分子工具

ZFN和TALEN需要进行克隆、与Cas9 mRNA和sgRNA的组合相比,

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