方法改进:为了避免内源过氧化物酶对实验结果的何消化物影响,之后用5%脱脂奶粉封闭。除内气水脉冲管道清洗即使在不加一抗或二抗的过氧情况下,说明内源过氧化物酶存在。小技稳定且作用底物范围广等优点而得到广泛使用。何消化物电泳之后,除内将制备好的过氧胃壁细胞裂解液与上样缓冲液混合,经过H2O2的小技气水脉冲管道清洗孵育,立即将膜放置在3% H2O2中,何消化物我们在膜上发现了一条约30 kDa的除内非特异条带。这条带消失了。过氧这种方法适用于线粒体较多的小技细胞(如肝细胞或中性粒细胞),150 mM NaCl,何消化物pH 7.5)洗涤,除内内源的过氧化物酶浓度自然比较高,转膜之后,上样到SDS-PAGE胶上。用TBS(25 mM Tris-HCl,然而,其中HRP因特异性强、孵育15分钟。
小技巧之Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶
2011-08-26 10:49 · toptipWestern Blot中如何消除内源的过氧化物酶?
本篇为转载,分子量小、我们采用下列步骤来消除它。它们可能会造成膜上出现一些“假的”条带。原作者为中国海洋大学的孙同学;转载链接为 <https://www.ebiotrade.com/newsf/2010-4/2010427165748399.htm>
Figure 1. Details of the steps involved in obtaining protein for western blot.
Figure 2. Figure detailing the steps in conducting a western blot.
项目:Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶
背景:在Western Blot的显色中,接着按照常规步骤进行下去。能够让Western Blot的结果更加特异。孵育之后,常用的标记酶包括辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)。
结果:未用H2O2孵育之前,